實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；2012083MSC | 貼壁生長 | EY-X64080 |
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細(xì)胞名稱 家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；2012083MSC
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細(xì)胞系來源于一雄性家兔的骨髓。2012年由中科院昆明細(xì)胞庫建立。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:2傳代；3-4天一次
傳代情況: P2
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 熒光法（-）
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
促腎上皮質(zhì)激素釋放激素受體1檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBScorticotropin releasing hormone receptor
促腎上皮質(zhì)激素釋放激素受體2檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBScorticotropin releasing hormone receptor
亞甲基四氫葉還原酶檢測試劑盒生長特性: 懸浮生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSmethylenetetrahydrofolate reductase
自噬相關(guān)16樣蛋白1檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: L15:LeibovitzMedium10%FBSAutophagy Related Protein 16 Like Protein 1
免疫相關(guān)鳥苷三磷酶基因檢測試劑盒生長特性: 懸浮生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSImmunity-related GTPase family M protein
皮質(zhì)類固醇結(jié)合球蛋白檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBSCorticosteroid Binding Globulin
淋巴樣增強(qiáng)因子1檢測試劑盒生長特性: 懸浮生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSLymphoid enhancer-binding factor 1
谷氨NMDA受體epsilon-2亞基檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBSGlutamate NMDA receptor subunit epsilon-2
谷氨NMDA受體epsilon-1亞基檢測試劑盒生長特性: 半貼壁生長培養(yǎng)條件: Grace'sInsectMedium(GIMw/oBSA,FCS,WholeEggUltrafiltrate)10%FBSGlutamate NMDA receptor subunit epsilon-1
檢測試劑盒生長特性: 懸浮生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSKLK
血纖維蛋白溶解酶檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSPlasmin
鞘脂激活蛋白原檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: L15:LeibovitzMedium10%FBSProsaposin
TGF-β誘導(dǎo)早期基因1檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSTGF-beta-inducible early response gene-1
CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白1檢測試劑盒生長特性: 懸浮生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSCCAAT Enhancer Binding Protein 1
檢測試劑盒生長特性: 懸浮生長培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBSElastase
去乙酰化酶3檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBSSirtuin 3
芳香酶檢測試劑盒生長特性: 貼壁生長培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBSAromatase
家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；2012083MSC輔酶Q10303-98-0英文名：Coenzyme Q10
英文別名：Aqua Q10; Bio-Quinon; Bio-Quinone Q10; CoQ10; Cosmesome Q 10; Cudesan; Ensorb;
CAS登錄號：303-98-0
分子式：C59H90O4
分子量：863.34
分子結(jié)構(gòu)：
外觀：黃色或淺黃色結(jié)晶性粉末
規(guī)格：20mg/支
純度：≥ 98%
用途：用于含量測定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
提取來源：微生物發(fā)酵法輔酶Q10，半合成法，全合成。
溶解性：易溶于和，溶于、，微溶于乙醇，不溶于水和。
熔點(diǎn)：49℃
藥理藥效： 具有抗衰老，抗氧化，抗腫瘤，保護(hù)皮膚作用。用于下列疾病的輔助治療1、心血管疾病，如：病 性心肌炎、慢性心功能不全。2、肝炎，如：病性肝炎、亞急性肝壞死、慢性活動性肝炎。3、癌癥的綜合治療：能減輕放療、等引起的某些不良反應(yīng)。
貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光
有效期： 2年
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