本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的補體片斷 5a（C5a）濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于補體系統、炎癥趨化及免疫損傷研究等領域。
產品名稱 |
小鼠補體片斷5a(C5a)elisa試劑盒 | 英文名稱 | C5a ELISA Kit |
貨號 | CS-1201E | 規格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理：
固相化：微孔板預先包被抗小鼠 C5a 抗體。
結合：加入標準品或樣本，C5a 被固相抗體捕獲。
檢測：加入化的抗小鼠 C5a 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍色變為黃色。
測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細胞培養上清可能因細胞狀態等因素導致檢測波動，建議設復孔。
操作步驟：
試劑準備將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。標準品按說明書進行梯度稀釋，配制系列濃度標準曲線溶液。
實驗流程加樣：設置空白孔、標準孔、待測樣品孔，空白孔僅加稀釋液，其余孔分別加入標準品或待測樣品，37℃孵育。加酶標抗體：除空白孔外，每孔加入酶標抗體，輕輕混勻，37℃避光孵育。洗滌：棄去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后甩干，重復洗滌 4-5 次，最后拍干殘留液體。顯色：每孔加入 TMB 顯色液，37℃避光孵育，孔內呈現藍色。終止：每孔加入終止液，混勻后顏色由藍色轉為黃色。檢測：在 450nm 波長下測定各孔 OD 值，15 分鐘內完成讀數。
關鍵提示實驗全程嚴格控溫，孵育時使用封板膜避免蒸發。洗滌需充分，否則易造成高背景、結果偏差。顯色液需避光，終止順序與加樣順序保持一致，確保充分混勻。
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