本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRF）濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于應激反應、下丘腦 - 垂體 - 腎上腺軸及內(nèi)分泌研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子elisa試劑盒 | 英文名稱 | CRF ELISA Kit |
貨號 | CS-1172E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理：
固相化：微孔板預先包被抗小鼠 CRF 抗體。
結(jié)合：加入標準品或樣本，CRF 被固相抗體捕獲。
檢測：加入化的抗小鼠 CRF 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍色變?yōu)辄S色。
測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細胞培養(yǎng)上清可能因細胞狀態(tài)等因素導致檢測波動，建議設復孔。
操作步驟：
1.試劑提前室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按說明書稀釋配制。
2.設置空白孔、標準品孔、待測樣品孔，精準加樣后封板。
3.37℃恒溫孵育結(jié)合反應，結(jié)束后棄孔內(nèi)液體拍干。
4.加滿洗滌液浸泡清洗，重復洗板 3–5 次，去除未結(jié)合雜質(zhì)。
5.除空白孔外，每孔加入 HRP 酶結(jié)合物，再次 37℃溫育。
6.重復洗板流程洗凈游離酶標抗體，保證背景干凈。
7.依次加入顯色液避光顯色，待梯度藍色清晰顯現(xiàn)。
8.加入終止液終止反應，顏色由藍轉(zhuǎn)黃，即刻用酶標儀讀取 OD 值。
9.根據(jù)標準曲線擬合計算，得出樣本目標物質(zhì)濃度。
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