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兔原代椎間盤纖維環原代細胞

商品屬性：

形態：多角形細胞，不規則
培養基：兔椎間盤纖維環細胞wan全培養基

培養環境：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代特征：可傳5代左右；3代以內狀態

細胞基本屬性：

種屬來源：兔

組織來源：椎間盤椎間盤

生長特性：貼壁生長

產品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：

產品貨期：5-6周左右

運輸方式：T25培養瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應限制：僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用

背景介紹：:兔椎間盤纖維環細胞采用膠原酶-中性蛋bai酶聯合消化法并結合軟骨細胞專用培養基培養篩選制備而來，兔椎間盤纖維環細胞分離自椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板、纖維環、髓核組成的一個密封體。上下有軟骨板，是透明軟骨復蓋于椎體上，下面骺環中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環一起將髓核密封起來。纖維環由膠原纖維束的纖維軟骨構成，位于髓核的四周。纖維環的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉負荷。纖維環的前側及兩側較厚，而后側較薄。纖維環的前部有強大的前縱韌帶，后側的后縱韌帶較窄、較薄。纖維環細胞密度為9000個細胞/mm3，其外層的細胞呈梭型，主要屬于纖維細胞，內層細胞呈圓形，主要屬于軟骨細胞。在培養的情況下，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結構表現，它們的核較圓，核仁較明顯。細胞質內可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內質網和滑面內質網。細胞質內線粒體多，為橢圓形，有的可看到雙層單位膜，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細胞質內有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復合體和分泌顆粒，纖維環細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛，保證纖維環生理代謝活動所需的構造物質的供給。一但這種供給減少，纖維環的生物性能就會減弱，椎間盤開始退變。

原代細胞培養的主要步驟包括：

?一、剝離組織，去除外膜、結締組織等?：將組織從動物體中取出，并去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?：使用生理鹽水或其他適當的緩沖液洗滌組織，然后將其剪成約1mm大小的小塊。

三、?用0.1%～0.2%的消化?：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩沖液中，進行消化。消化時間可根據具體實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

?四、吹打分散后，過濾、計數?：將消化后的細胞吹打到一個離心管中，然后過濾、計數。

五、?按30萬/毫升分瓶培養?：將計數后的細胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養。

細胞培養操作：

收貨處理取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態

傳代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養

傳代代數可傳5代左右；3代以內狀態

傳代比例傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法：

1.吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4.待細胞貼壁后，培養觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養基。

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