1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
商品描述：
產(chǎn)品名稱 | ZR-75-30 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | 規(guī)格 | 1*125ml/500ml |
用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) | 貨號(hào) | EY-XP5730 |
ZR-75-30 細(xì)胞專用培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持ZR-75-30 細(xì)胞良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。
本產(chǎn)品中已包含ZR-75-30 細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于ZR-75-30細(xì)胞的培養(yǎng)。
產(chǎn)品主要成分
RPMI-1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 395 ml
特級(jí)胎牛血清 100 ml
P/S青霉su-鏈霉su 5ml
運(yùn)輸和保存
運(yùn)輸 ：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸
保存方法： 2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；-20℃，避光，保存6個(gè)月。
質(zhì)量控制
檢測(cè)項(xiàng)目 | 質(zhì)量控制 |
澄清度 | 澄清 |
PH | 7.3±0.2 |
內(nèi)毒素含量 (EU/mL) | ≤10 |
無菌檢測(cè) | 細(xì)菌 | 陰性 |
真菌 | 陰性 |
支原體 | 陰性 |
細(xì)胞生長(zhǎng)試驗(yàn) | 細(xì)胞形態(tài) | 正常 |
細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) | 合格 |
注意事項(xiàng)：
僅限科研用。
培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
公司正在出售的產(chǎn)品：
SU-DHL-4人B淋巴瘤細(xì)胞 | A375 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人肺支氣管癌細(xì)胞NCI-H1666(STR鑒定正確) | NCI-H2228人肺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
小鼠雜交瘤細(xì)胞(抗CD3)OKT 3（種屬鑒定） | NCI-H23人肺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
袋鼠腎細(xì)胞Pt K1 (NBL-3) （種屬鑒定） | NCI-H2452人間皮瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H1437(STR鑒定正確) | NCI-H292人肺癌(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6（種屬鑒定） | NCI-H295R人腎上腺皮質(zhì)細(xì)腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞GL261（種屬鑒定） | NCI-H358人非小肺癌 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人腎小管上皮細(xì)胞HKC(STR鑒定正確) | NCI-H3122人非小肺癌 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人慢性B細(xì)胞白血病細(xì)胞MEC-1(STR鑒定正確) | NCI-H446人小肺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人肺癌細(xì)胞株MSTO-211H(STR鑒定正確) | NCI-H460 [H460] 人大肺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞MT-4(STR鑒定正確) | NCI-H508人結(jié)腸直腸腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
大鼠肝細(xì)胞IAR20（種屬鑒定） | NCI-H520人肺鱗癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
大鼠角質(zhì)形成細(xì)胞 | NCI-H522 人非小肺癌腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人骨肉瘤細(xì)胞SJSA-1 (STR鑒定正確) | NCI-H524人非小肺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
小鼠紅白血病細(xì)胞MEL（種屬鑒定） | NCI-H661[h661]人大肺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
點(diǎn)擊放大
會(huì)員_a.png)