本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)豬血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的熱休克蛋白70kDa蛋白1A（HSPA1A）濃度。檢測(cè)范圍覆蓋0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá)0.15 ng/mL，適用于應(yīng)激反應(yīng)評(píng)估、細(xì)胞凋亡調(diào)控及抗氧化損傷研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
豬熱休克蛋白70kDa蛋白1Aelisa試劑盒 | 英文名稱 | HSPA1A ELISA Kit |
貨號(hào) | CS-0314E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
核心原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被抗豬HSPA1A抗體。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，HSPA1A被固相抗體特異性捕獲。
檢測(cè)：加入標(biāo)記的抗豬HSPA1A抗體和HRP標(biāo)記的親和素，形成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。
顯色：加入TMB底物，被HRP催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測(cè)定：用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值)，濃度與OD值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無(wú)熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細(xì)胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項(xiàng)
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細(xì)胞培養(yǎng)上清可能因細(xì)胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測(cè)波動(dòng)，建議設(shè)復(fù)孔。
操作步驟：
1. 試劑準(zhǔn)備
將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），洗滌緩沖液按1:19稀釋。?
標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：取6管標(biāo)準(zhǔn)品，按說(shuō)明書(shū)稀釋至0.156-10 ng/mL。
2. 實(shí)驗(yàn)流程
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測(cè)抗體?：每孔加入100μL檢測(cè)抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。?
?檢測(cè)?：450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度（OD值），15分鐘內(nèi)完成。
關(guān)鍵提示
顯色底物避光保存，混合后應(yīng)為無(wú)色。
終止液加入順序需與顯色一致，充分混勻避免綠色殘留。
使用封板膜防止蒸發(fā)，確保孵育溫度穩(wěn)定。
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