產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞提取物中的組織蛋白酶K（cath-K）蛋白濃度。檢測(cè)范圍覆蓋0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá)0.16 ng/mL，適用于骨吸收、組織重塑、腫瘤侵襲及骨質(zhì)疏松相關(guān)研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：大鼠組織蛋白酶K(cath-K)elisa試劑盒
英文名稱：cath-K ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號(hào)：CS-5179E
檢測(cè)原理：
大鼠組織蛋白酶K(cath-K)elisa 試劑盒的原理是雙抗體夾心法，通過(guò)固相載體捕獲抗原，再用酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行識(shí)別，最后通過(guò)底物顯色反應(yīng)來(lái)定量檢測(cè)。
固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠cath-K抗體。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，cath-K被固相抗體捕獲。
檢測(cè)：加入生物su化的抗大鼠cath-K抗體和HRP標(biāo)記的親和素，形成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。
顯色：加入TMB底物，被HRP催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測(cè)定：用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值)，濃度與OD值成正比。
實(shí)驗(yàn)步驟?：
?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測(cè)抗體?：每孔加入100μL檢測(cè)抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。
?檢測(cè)?：450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?：
1.試劑平衡試劑盒室溫平衡 30 min；濃縮洗滌液按說(shuō)明書(shū)稀釋混勻。
2.設(shè)孔加樣設(shè)空白、標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品孔，精準(zhǔn)加樣，封板。
3.溫育結(jié)合37℃孵育 30–60 min，棄液拍干。
4.洗板加滿洗滌液浸泡，甩干拍干，重復(fù)3–5 次。
5.加酶結(jié)合物除空白孔外每孔加 HRP 標(biāo)記液，封板 37℃孵育。
6.再次洗板充分洗凈未結(jié)合游離酶，控干殘留液體。
7.顯色避光加顯色液 A/B，避光 37℃顯色 10–15 min。
8.終止讀數(shù)加終止液變色穩(wěn)定后，立刻酶標(biāo)儀讀 OD 值。
9.結(jié)果計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合，換算樣本濃度。
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